染料法荧光定量

4. 产量高：10 mg 大鼠肾产量15 - 25 μg、肝产量35 - 45 μg、肺产量10 - 15 μg，1×106 293细胞产量20 - 30 μg、Hela细胞产量10 μg左右。

2. 样本适用范围广：具体投入量：叶片：50 - 100 mg；多糖块茎、块根、种子：20 - 50 mg；水果果肉：100 - 200 mg；真菌：20 - 100 mg。

3. 产量高：100 mg水稻叶产量42 μg、玉米叶54 μg、烟草叶 20μg；50 mg小麦种子产量5.8 μg、水稻种子3.5 μg、油菜籽 32.15 μg；100 mg 西瓜产量5.5 μg、桃果肉7 μg、草莓9 μg、青提2.5 μg。

2. 广泛模板兼容性：兼容Trizol提取的样本、降解样本（Rin=1）、FFPE样本、病毒样本（病毒PEDV、PRRSV）、多糖多酚植物、水生生物、组织、真菌、细菌。

1. 优异的逆转录特异性：多个miRNA定量实验，每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录，单管单靶标，确保每个靶标能够特异性逆转。

2. 逆转录RNA投入量：Total RNA：10 pg - 1 μg，但是不同miRNA表达丰度不同，建议尽量投入0.5 - 1 μg RNA。miRNA：参考1/10 - 1/5 total RNA的量加入，具体还是要根据目标miRNA的丰度来调整。

3. 常见内参：Human (U6、RNU48、RNU44、U47) ；Mouse (U6、snoRNA-202、snoRNA-234、snoRNA-420) 。

1. 无差别加尾如何保证较高特异性：投入total RNA，所有的RNA都会被加尾。但实际上后续由于酶和体系特殊，会最大限度降低mRNA的逆转录，确保miRNA以最大效率被逆转出来。

2. miRNA、pre-miRNA和pri-miRNA的序列查找：可以使用miRBase来查找miRNA序列和pre-miRNA序列。目前针对pri-miRNA还没有专门的数据库，可以尝试获取pre-miRNA序列后，在genebank进行blast比对。